SS-31: Praktischer Forschungs- und Anwendungsleitfaden

SS-31 ist eine einzigartige Forschungsverbindung, die sorgfältige Handhabung erfordert, um ihre mitochondrien-targeting-Eigenschaften zu erhalten. Dieser Leitfaden behandelt die praktischen Aspekte der Arbeit mit SS-31 (Elamipretid) in präklinischen und klinischen Forschungsumgebungen, einschließlich Vorbereitung, Verabreichung, Dosierung, Lagerung und Überlegungen zum Versuchsdesign. SS-31 wird als lyophilisiertes Pulver oder in einigen Formulierungen als gebrauchsfertige Injektionslösung geliefert. Die lyophilisierte Form sollte ein weißes bis cremefarbenes Pulver sein. Bei minus 20 Grad Celsius für langfristige Stabilität lagern, wo es unter geeigneten Bedingungen 12 bis 24 Monate lang wirksam bleibt. Die D-Aminosäure (D-Arginin) am N-Terminus und die C-terminale Amidierung verleihen eine erhöhte Resistenz gegen enzymatischen Abbau im Vergleich zu natürlichen L-Aminosäure-Peptiden. Der Dimethyltyrosin-Rest ist die chemisch empfindlichste Komponente und sollte vor längerer Lichtexposition geschützt werden. Zur Rekonstitution von lyophilisiertem SS-31 steriles Wasser, bakteriostatisches Wasser (0,9 Prozent Benzylalkohol) oder sterile Kochsalzlösung je nach der beabsichtigten Anwendung verwenden. Lösungsmittel langsam entlang der Innenwand des Fläschchens hinzufügen und das Pulver allmählich auflösen lassen. Sanftes Schwenken ist akzeptabel, aber energisches Schütteln vermeiden, da dies Schaumbildung verursachen kann. Die rekonstituierte Lösung sollte klar und farblos bis hellgelb sein. Bei einem 5-mg-Fläschchen ergibt Rekonstitution mit 1 mL Lösungsmittel eine Konzentration von 5 mg pro mL. Rekonstituiertes SS-31 bei 2 bis 8 Grad Celsius lagern und bei Rekonstitution mit bakteriostatischem Wasser innerhalb von 14 bis 21 Tagen verwenden, oder innerhalb von 24 Stunden bei Rekonstitution mit sterilem Wasser ohne Konservierungsmittel. Für die Langzeitlagerung des rekonstituierten Peptids Aliquots in geeigneten Volumina vorbereiten und bei minus 20 Grad Celsius einfrieren. Gefrier-Tau-Zyklen auf maximal zwei bis drei minimieren. Präklinische Dosierung in Mausmodellen reicht typischerweise von 3 bis 10 mg pro kg pro Tag, verabreicht durch intraperitoneale Injektion. Die am häufigsten verwendete Dosierung in publizierten Studien ist 5 mg pro kg pro Tag. Behandlungsdauern reichen von akuten Einzeldosis-Studien bis zu chronischen Protokollen von 8 bis 12 Wochen. Klinische Dosierung, die durch Phase-2- und Phase-3-Studien etabliert wurde, verwendet subkutane Injektion mit 0,25 mg pro kg pro Tag, was für einen 70-kg-Erwachsenen etwa 15 bis 20 mg pro Tag entspricht. Höhere klinische Dosen von 40 mg pro Tag wurden ebenfalls evaluiert. Verabreichungstechnik für subkutane Injektion folgt der Standardpraxis. Bevorzugte Injektionsstellen sind der Bauch (einen Radius von 5 Zentimetern um den Nabel meidend), der vordere Oberschenkel und der hintere Oberarm. Injektionsstellen bei jeder Verabreichung rotieren. Insulinspritzen mit 27- bis 31-Gauge-Nadeln verwenden. Die Nadel in einem Winkel von 45 bis 90 Grad je nach subkutaner Gewebetiefe einführen, die Lösung langsam über 5 bis 10 Sekunden injizieren und die Nadel 5 Sekunden vor dem Herausziehen an Ort und Stelle halten. Für in-vitro-Zellkulturexperimente wird SS-31 typischerweise in Konzentrationen von nanomolar bis niedrig-mikromolar verwendet. Die spezifische Konzentration hängt vom Zelltyp und dem Assay ab, aber 0,1 bis 10 Mikromolar deckt die meisten Anwendungen ab. Wichtige experimentelle Messgrößen für SS-31-Forschung umfassen das mitochondriale Membranpotenzial, gemessen durch JC-1, TMRE oder TMRM Fluoreszenzfarbstoffe; ATP-Produktion mit Luciferase-basierten Assays; Erzeugung reaktiver Sauerstoffspezies mit MitoSOX Red; Sauerstoffverbrauchsrate mit dem Seahorse XF Analyzer; Cardiolipin-Inhalt und Oxidationsstatus.