LL-37 : guide pratique de recherche et d'utilisation

LL-37 est fourni comme peptide lyophilisé synthétique (séquence LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES, PM 4 493,33 Da), pureté ≥95 %. Il se présente en quantités de 1, 5 ou 10 mg/flacon comme sel trifluoroacétate ou acétate. Le sel acétate est préférable : le TFA est cytotoxique à concentrations élevées. ## Reconstitution Dissoudre dans de l'eau exempte d'endotoxines jusqu'à 1–5 mg/mL. Utiliser des tubes en polypropylène ou siliconés (LL-37 s'adsorbe sur verre/plastique). Pour des dilutions <1 μM, ajouter 0,01 % de BSA. ## In vitro : Test antimicrobien (CMI) Méthode de microdilution en bouillon selon CLSI. Plaques 96 puits en polypropylène (pas polystyrène !). Milieu : bouillon Mueller-Hinton. CMI typiques : E. coli 2–16 μg/mL, S. aureus 16–64 μg/mL, P. aeruginosa 16–64 μg/mL, C. albicans 8–32 μg/mL. ## Recherche sur les biofilms Prévention : LL-37 0,5–16 μg/mL au moment de l'inoculation, plaques 96 puits, 24 h. Disruption : biofilms matures (24–48 h) + LL-37 32–256 μg/mL, 24 h ; coloration LIVE/DEAD. ## In vitro : Immunomodulation Chimiotactisme : chambres de Boyden modifiées, LL-37 1–10 μM (chambre inférieure), 2–4 h. Activation des DC : LL-37 5–20 μM + LPS. Complexes LL-37-ADN : 10–40 μM + ADN génomique (1:1–10:1 en masse) → IFN-I des DC plasmacytoïdes. ## In vivo Modèles de cicatrisation (souris) : 50–200 μg/plaie 1–2 f/j en gel. Modèles d'infection : 2–10 mg/kg IP. Sepsis : 4 mg/kg IP. ## Stockage Lyophilisé : –20 °C (≥24 mois) ou –80 °C (≥36 mois). Reconstitué : –20 °C en aliquots individuels. À 2–8 °C : 1–2 semaines. Ne pas recongeler plus de 3 fois. ## Contrôle qualité SM : PM 4 493,33 Da (monoisotopique). HPLC : ≥95 %. LAL : <0,1 EU/mg (critique pour la recherche immunologique — la contamination par LPS fausse les résultats). Contrôles : sLL-37 (séquence brouillée), LL-37 dénaturé, polymyxine B.