MGF: Практическое руководство по исследованиям

Работа с нативным механо-ростовым фактором представляет уникальные задачи, отличающие его от большинства других исследовательских пептидов. Его крайне короткий период полувыведения в сыворотке, измеряемый в минутах, а не часах, означает, что стандартные практики обращения с пептидами должны быть адаптированы для обеспечения достижения соединением целевой ткани в биологически активной форме. Растворение MGF требует особой тщательности ввиду восприимчивости пептида к деградации. Начните с лиофилизированного флакона, хранящегося при минус 20 °C, и дайте ему выровняться до комнатной температуры в течение примерно 5–10 минут. Поскольку MGF будет использован немедленно после растворения в большинстве протоколов, бактериостатическая вода является стандартным растворителем. Добавьте растворитель медленно по внутренней стенке флакона. Для типичного флакона с 2 мг добавление 2 мл бактериостатической воды даёт концентрацию 1000 мкг/мл. Критическим отличием введения MGF от других пептидов является абсолютная необходимость внутримышечной инъекции непосредственно в целевую мышцу. Подкожная инъекция нативного MGF практически неэффективна, поскольку пептид разрушается в подкожной ткани и кровотоке прежде, чем достигнет какой-либо удалённой мышечной ткани. В исследованиях на грызунах это предполагает инъекцию в брюшко целевой мышцы — как правило, переднеберцовой, икроножной или четырёхглавой — с использованием тонкоигольного шприца. Исследовательское дозирование нативного MGF в опубликованных доклинических исследованиях обычно составляло 5–50 мкг на место инъекции для грызунов. Некоторые исследования использовали повторные ежедневные инъекции в нижней части этого диапазона, тогда как другие применяли однократные введения более высоких доз для исследования острой активации клеток-сателлитов. Время введения MGF относительно мышечной нагрузки или повреждения является важной экспериментальной переменной. В нормальной физиологии адаптации мышц пик экспрессии мРНК MGF приходится на первые несколько часов после механической нагрузки и снижается до подъёма экспрессии IGF-1Ea. Это временное́ соотношение предполагает, что биологическое окно действия MGF приходится на ранние часы ответа на восстановление мышц. Исследователи, изучающие роль MGF в адаптации к нагрузке, как правило, вводят пептид в течение 1–4 часов после протокола нагрузки. Хранение нативного MGF требует строгого соблюдения температурного режима. Лиофилизированный порошок следует хранить при минус 20 °C, где он сохраняет стабильность приблизительно 12 месяцев. После растворения в бактериостатической воде раствор в идеале следует использовать немедленно. Соображения по дизайну эксперимента с MGF должны учитывать ряд специфических факторов. Во-первых, поскольку MGF вводится локально в конкретные мышцы, контралатеральные мышцы могут служить внутренними контролями. Во-вторых, переходный характер экспозиции MGF означает, что измерения результатов должны быть правильно согласованы по времени. Активацию клеток-сателлитов можно оценить по включению BrdU или EdU через 24–48 часов после введения MGF, тогда как гипертрофия и регенерация миофибр требуют более длительных периодов наблюдения — 1–4 недели.